:::石家庄平安医院:::

开展肝内胰岛细胞胰腺干细胞移植治疗糖尿病

文章类型：公司新闻文章加入时间：2008年4月8日16:41

石家庄平安医院生物技术中心成立于1990年，经过10几年的发展已拥有PCR基因检测室、流式细胞检测室、细胞室。并与省医学科学院共同合作进行十多年的动物试验研究，特别是在白血病动物模型和药物研究以及糖尿病胰岛细胞移植治疗1型和2型重度糖尿病方面探索出一条较成功的经验。积累了大量实验与临床数据。并成功应用于人1型糖尿病的治疗，获的了较满意的效果。为临床应用奠定了坚实理论和实践基础。

何谓胰岛细胞移植？

胰岛细胞移植就是将具有生理功能且能够分泌胰岛素的细胞植入已经丧失分泌胰岛素的糖尿病患者，包括1型糖尿病和部分2型糖尿病人，胰岛移植不仅能够生理性地纠正糖尿病患者的糖代谢异常，更重要的是可以防止糖尿病微血管病变的发生和发展。从理论上讲胰岛细胞移植是比胰腺移植更加合理的治疗方法。

胰腺干细胞移植？

胰胰腺干细胞移植主要是针对胰岛细胞移植数量不足而进行的一种体外诱导扩增的方法，即将胰腺干细胞进行分离培养并传代，在体外多种细胞因子的诱导和抑制的作用下，快速增殖并具有多向分化潜能，同时能分化形成胰岛β和α细胞。再进行体内移植。

胰岛细胞移植和胰腺干细胞移植的适应症㈡

1、5岁以上的1型糖尿病人，主要症状为多饮、多尿、多食和体重减轻，易发生脱水和酮症酸中毒、昏迷等。常可伴发视力障碍及肾功能衰竭，末梢神经损伤。体重明显减轻（体重指数小于25），胰岛素释放试验、C-P释放试验的分泌曲线低平，即分泌胰岛素和C-P绝对不足，完全丧失胰岛功能，必须进行胰岛细胞移植和胰岛素治疗。阻止病情的进一步发展，避免并发症的发生和发展。

2、非肥胖型2型糖尿病人，即分泌胰岛素和C-P相对不足，胰岛素释放试验、C-P释放试验的分泌曲线往往高峰后移，常出现在2或3小时，说明胰腺功能受损或对刺激分泌迟缓。临床常表现症状为多饮、多尿、多食体重正常或增加。对于这些2型糖尿病人可进行胰岛细胞移植（体重指数不可大于28），从而避免多数2型糖尿病人使用胰岛素治疗，阻止2型年轻女性胰岛素治疗向肥胖发展，防止并发症的发生。

胰岛细胞移植和胰腺干细胞移植前的检查㈢

凡适合移植和要求移植的糖尿病人均要做以下检查：

1、胰岛功能检测：胰岛素释放试验、C-P释放试验。

2、胰岛素自身免疫抗体：抗胰岛素自身抗体（IAA）、抗胰岛细胞抗体（ICA）、谷氨酸脱羧酶抗体（GAD）、酪氨酸磷酸酶（IA-2）。

3、病毒的检测：柯萨奇病毒-4（COXB-4）、EB病毒、腮腺病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、HIV病毒。

4、基因检测：HLA-DR3、HLA-DR4、

合并症的检查：眼底检查、肌电图检查、尿微量蛋白β2、、白蛋白检查。

5、病人常规住院检查：生化肝、肾功、血脂、血尿淀粉酶、糖化血红蛋白、糖化血清蛋白、B超、心电图、X光片、体重指数等。

移植的最佳部位和方法㈣

移植的部位是有效成功至关重要的一步，现在国际上承认的移植部位就是肝内移植。

1、经肝动脉移植：我院多采用此方法进行移植，主要基于以下考虑：⑴此方法国际承认；⑵肝脏为肝动脉和门静脉两路供血（以门静脉为主），通过肝动脉植入胰岛细胞不会明显影响肝脏功能和血流动力学特点，而植入的细胞团停留在血运丰富的肝组织内，有利于植入胰岛细胞的存活；⑶植入的胰岛细胞随血流进入肝窦或窦前肝血管内，而减少了手术或穿刺植入移植体周围形成纤维瘢痕的可能，有利于植入的细胞存活和功能的发挥；⑷肝脏是糖代谢的重要器官，由于肝细胞与胰岛细胞在糖代谢方面相互影响，肝脏是胰岛素的重要靶器官，胰岛移植于肝内比较接近生理状态，有利于植入胰岛细胞生理功能的发挥；⑸肝脏作为相对免疫特许区，发生移植物抗宿主病的几率较低，有利于移植细胞的存活。⑹植入的胰岛细胞比较拟合生理状态，对糖尿病控制的效果明显，优于其他部位的移植；⑺肝脏移植技术设备要求高，又安全，可靠。⑻肝内移植在我院介入室进行，

2、肾被膜下移植：根据病人的实际情况，我院也施行肾被膜的移植，如病人身体条件不允许进行肝内移植、病人经济等问题。肾被膜移植在B超引导下通过穿刺将细胞植入包囊即可，操作比较简单、安全。

胰腺干细胞植入成功的关键步骤㈤

1、细胞的制备；细胞的来源：采用流产人胚胎（5-7月胎龄）胰腺组织，于解剖显微镜下去除周围的脂肪和结缔组织。轻轻地分离并切碎胰腺，胶原酶370C震胰荡消化30分钟，然后加冷牛血清和Hanks液保护细胞并终止消化。此方法不但可以分离外分泌腺，还可以降低免疫原性从而减少免疫排斥反应。1500转离心10分后弃上清，用生长液保存具有生理功能的细胞备用，达到细胞量再行植入。

2、胰腺干细胞的制备：由于胚胎数量不足，往往不能满足胰岛细胞种植的需要，就须在体外进行扩增，达到种植的细胞量。方法同胰岛细胞的制备，在细胞终止消化后静置10分，弃上清，0。25%胰蛋白酶370C消化至细胞悬液，在无糖DMEM培养基（含非必需氨基酸，B27）中培养。两天后换液加入终浓度为10µg/ml的KGF，1mg/ml的ITS。以后每三天换液一次并改换培养基的成分为葡萄糖浓度为17。8mmol/L，10mmol/L尼可酰氨，2%胎牛血清（诱导）其他营养成分不变，观察其生长情况并在其6-7天时进行传代（扩增）。

3、细胞植入：当胰岛细胞和胰腺干细胞的数量达到糖尿病人种植时，先进行细胞的生理功能鉴定及病毒和细菌培养，排除病毒和污染后再行移植。

㈠、细胞数量是影响种植成功的关键因素，因此每个人种植的数量是不同的，严格按每公斤体重6000个胰岛当量以上进行植入。

㈡、细胞的纯度，即将培养好的胰腺细胞采用双硫腙染色以平板计数法结合EIN法对胰岛阳性细胞计数，通常细胞纯度在80%左右。

㈢、细胞活性鉴定：采用吖啶橙和碘丙啶对细胞进行染色，吖啶橙染色后在荧光显微镜下活细胞呈绿色荧光，死亡的细胞碘丙啶染色结合后发出红色荧光。细胞染色后活度要达到90%以上。

4、降低免疫原性：防止免疫排斥反应是植入细胞成功的关键之一，当细胞在制备中370C消化30分钟，即可降低其免疫原性；应用免疫抑制剂对防止植入细胞后的急性排斥反应很重要，成人植入后，联合应用免疫抑制剂包括环孢素A、硫唑嘌呤、霉酚酸脂、他克莫司等。约服用一个月的免疫抑制剂无免疫排斥反应即可停用。5-20岁处在生长发育期慎用或不用，或改用不影响发育的免疫排斥剂。

细胞种植后的检测和效果评价㈥

㈠、植入细胞后，24小时内要观察病人生命体征是否正常，同时要做肝、肾、胰等B超检查。如个别病人发烧做相应处理4-24小时即可恢复正常。

㈡、植入细胞后，常发生排异是由T淋巴细胞介导的依赖反应。我院检测非特异标志是通过检测分子表达及细胞功能如淋巴细胞混合培养进行。

㈢、植入细胞功能监测，可通过检测胰岛素释放、C-P释放水平（与植入前比较）。胰岛素用量是否减少，血糖是否降低和平稳等。

㈣、效果评价是成功与否的关键，无论胰岛细胞还是胰腺干细胞植入现在是糖尿病治

文章出处：石家庄平安医院

文章作者：SAYYES

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